چکیده:
مقدمه : امروزه استفاده از siRNA برای خاموشسازی بیان ژنها در حال گسترش است . از جمله اهداف این تکنولوژی؛ جلوگیری از بیان عامل رشد اندوتلیال عروقی است . مطالعه حاضر به منظور جلوگیری از بیان گیرنده تیپ II این عامل ( Vascular Endothelial Growth Factor :2-VEGFR Receptor II) با استفاده از siRNA اختصاصی در محیط کشت صورت گرفته است . مواد و روشها: ابتدا با استفاده از توالی ژن هدف، توالی های siRNA اختصاصی علیه آن طراحی ؛ تایید اختصاصیت و ساخته شد. از طرف دیگر cDNA سلول HUVEC سنتز و با کمک پرایمر اختصاصی و PCR به میزان موردنیاز تکثیر شد و سپس در وکتور بیانی PEFGP-N1 درج و تایید شد. پلاسمید ناقل حاصله با استفاده از لیپوفکتامین به سلول Hela که فاقد بیان ژن هدف بود انتقال داده شد. میزان بیان GFP در وکتور اولیه و وکتور تراریخت شده در حضور و عدم حضور siRNA اختصاصی مورد ارزیابی قرار گرفت و میزان مهار ژن از طریق ارزیابی کاهش فلورسانس سبز رنگ ناشی از GFP و RT-PCR بررسی شد. نتایج : نتایج حاصل از دو siRNA به کار رفته بیانگر کاهش بیان ژن به ترتیب ٥٦% و ٦٢% در مقایسه با گروه کنترل بود (0.05>P). نتیجه گیری: siRNA اختصاصی طراحی شده علیه 2-VEGFR با استفاده از لیپوفکتامین به طور مناسب به داخل سلول منتقل و از بیان گیرنده به طور معنی دار جلوگیری نمود. در واقع این siRNA با قطع مسیر پیامرسانی رگزایی ، می تواند از پیدایش عروق جدید جلوگیری نماید بنابراین احتمالا می تواند به عنوان یک عامل مناسب درمانی جدید در جلوگیری و یا کاهش رگزایی مطرح باشد.
خلاصه ماشینی:
"مطالعه حاضر به منظور جلوگیری از بیان گیرنده تیپ II این عامل ( Vascular Endothelial Growth Factor :2-VEGFR Receptor II) با استفاده از siRNA اختصاصی در محیط کشت صورت گرفته است .
مولکول های siRNA اختصاصی طراحی شده علیه یک (Tumor Growth Factor Beta)،HIF-α (Hypoxy Induced mRNA کارآیی مختلفی ار خود نشان می دهند؛ لذا در مرحله طراحی Factor Alfa) مسئول شروع فرآیند رگزایی در اختلالات مختلف و سنتز باید به نکاتی توجه کرد که در بهبود کارآیی این مولکول مؤثر می باشند که همگی به نوعی با VEGF مرتبط هستند (٤ و ٥).
پس از ٢٤ ساعت پلیت حاوی ژن بیانگر صحت انجام درج ژن هدف در وکتور است (شکل ٢) باکتری از نظر رشد باکتری مورد بررسی قرار گرفته و کلنی های دارای همچنین توالی قطعه کلون شده نیز این مسأله را تأیید می کند.
تعیین نمود siRNA به کار رفته بر کدام دسته از ژن ها مؤثر بوده است به طوری که در مطالعه فروغیان و همکاران ، که بر روی سلول RPE و لذا در مطالعه حاضر میزبان فاقد بیان هر میزان از ژن هدف بود و لذا انجام شد؛ پس از انتقال siRNA اختصاصی علیه VEGF و HIF-α اثرات موارد مداخله ای در مطالعه بدین ترتیب حذف گردید و به عبارتی 9 / / شکل ٤- نتایج RT-PCR و منتعاقبا PCR بر روی سلول کنترل و تیمار در آگارز ١.
Vascular endothelial growth factor receptor 2-based dna SiRNA های طراحی شده با کمک وکتور بیانی که ژن GFP و ژن immunization delays development of herpetic stromal keratitis by VEGFR2را بیان می کرد (co-expression) مورد ارزیابی قرار گرفت antiangiogenic effects."